一、觀察菌落形態
菌落外觀：優質菌種外觀水靈、鮮活、飽滿，菌絲旺盛、整齊、均勻，這是菌絲細胞生命力強、有較強生長勢的表現。相反，如果菌種外觀發干，菌絲干癟，甚至表面出現菌皮或有粉狀物，菌體干縮，與瓶（袋）分離，還可能有黃水，則表明菌種可能已老化，活力下降。
菌落顏色：菌落的顏色也是判斷菌種活力的重要指標。如果菌落顏色發生明顯改變，可能意味著菌種已經發生了退化或變異。
二、檢測生長速度
生長速度變慢：長時間保存的菌種，如果其生長速度明顯變慢，可能意味著菌種活力下降。可以通過對比同一菌種在相同培養條件下的生長速度來進行判斷。
三、評估產孢子能力
產孢子能力下降：對于某些菌種，如放線菌、霉菌等，產孢子能力是其活力的重要體現。如果菌種在斜面上多次傳代后產生“光禿”現象，即產孢子能力明顯下降，那么可以判斷該菌種活力已下降。
四、檢測代謝產物
代謝產物減少：某些菌種在生長過程中會產生特定的代謝產物。如果長時間保存的菌種其代謝產物明顯減少，也可能意味著菌種活力下降。這需要通過檢測代謝產物的濃度來進行判斷。
五、考慮傳代次數和保存條件
傳代次數：連續傳代是加速菌種衰退的一個重要原因。傳代次數越多，發生自發突變的幾率越高，菌種衰退的風險也就越大。
保存條件：不適宜的培養和保藏條件也是加速菌種衰退的重要原因。不良的培養條件如營養成分、溫度、濕度、pH值、通氣量等，以及保藏條件如營養、含水量、溫度、氧氣等，都會誘發衰退型細胞的出現，并促進衰退細胞迅速繁殖。
綜上所述，判斷長時間保存的菌種活力是否下降，需要綜合考慮菌落形態、生長速度、產孢子能力、代謝產物以及傳代次數和保存條件等多個方面。如果發現菌種活力下降，可以采取相應的復壯措施來恢復其活力。
