一、無菌操作技術

1、定義　

是指在執行實驗過程中，防止一切微生物侵入機體和保持無菌物品及無菌區域不被污染的操作技術和管理方法；

無菌操作技術是微生物實驗的基本技術，是保證微生物實驗準確和順利完成的重要環節。

2、內容

無菌操作技術主要包括兩方面：

1）創造無菌的培養環境。包括提供密閉的培養容器、培養容器的滅菌、培養基的滅菌等；

2）在操作和培養過程中防止一切其它微生物的侵入的措施。包括紫外線殺菌、甲醛熏蒸、超凈臺的消毒與檢測、操作工具、器皿滅菌、操作方法等。

3、無菌操作原則

1）在執行無菌操作時，必須明確物品的無菌區和非無菌區，接種時必須穿工作服、戴工作帽應在進無菌室前用肥皂洗手，然后用75%酒精棉球將手擦干凈；

2）在操作前20～30分鐘要先啟動超凈臺和紫外燈，進行接種所用的吸管、平皿及培養基等必須經消毒滅菌，打開包裝未使用完的器皿，不能放置后再使用，金屬用具應高壓滅菌或用95%酒精點燃燒灼3次后使用。嚴禁用手直接拿無菌物品，如瓶塞等，而必須用消毒的鉗、鑷子等；

3）從包裝中取出吸管時，吸管尖部不能觸及外露部位，使用吸管接種于試管或平皿時，吸管尖不能觸及試管或平皿邊；

4）接種樣品、轉種細菌必須在酒精燈前操作，接種細菌或樣品時，吸管從包裝中取出后及打開試管塞都要通過火焰消毒；

5）接種環或接種針在接種細菌前應經火焰燒灼全部金屬絲，必須時還要燒到環和針與桿的連接處；

6）吸管吸取菌液或樣品時，應用相應的橡皮頭吸取，不得直接用口吸。傾倒平板應在超凈臺內操作，并且在開啟和加蓋瓶塞時需反復用酒精燈燒。