寫在前面

 

　　在微生物檢驗操作過程中，要保證檢測環境（如超凈臺、檢測室）以及所用工器具的潔凈程度，同時保證人員各種操作的規范性，盡量保證其無菌性，防止因人為原因操作失誤而出現誤差結果，同時在適宜溫度進行培養，為合理決策和指導生產提供依據。為保證檢測結果的準確性，我們應做好以下幾個方面：

 

　　培養基的滅菌及使用

 

　　1.每次配制時，要注意其生產日期是否在保質期內，查看其開瓶日期及瓶口密封性，保證其未變質，并且未吸潮。

 

　　2.培養基配制時，稱量要準確，包括鹽水的分裝要準確。

 

　　3.一定要保證現配制現滅菌，未滅菌的配好培養基不能長時間放置，更不可隔夜。

 

　　4.滅菌時要保證恒溫、恒壓，同時要保證有效的滅菌時間。

 

　　5.滅菌過的培養基要冰箱保存，可保存一周，一般不超過3 天。而且要遵循“先入先出”原則，先配制的要先使用。

 

　　6.在使用時，要根據當班次的使用量，用水浴鍋先將培養基溶化為液態，然后及時調低水浴溫度（先化好的可從水浴取出，放在水浴鍋鍋蓋上）待用，千萬不可長時間使培養基處于高溫狀態。

 

　　7.做產品微生物檢測時，傾倒培養基溫度在45℃左右，不可過燙，避免將菌燙死；也不可過涼，化好的培養基又結塊凝固，不便于觀察結果。

 

　　8.每瓶培養基均要做空白。

 

　　9.盡量集中做樣，避免頻繁打開同一瓶培養基瓶塞，增大培養基的污染幾率，出現誤差結果。

 

　　10.培養基剩余過少時，可先將其傾倒成空白用板。

 

　　11.高壓蒸汽滅菌器滅菌效果驗證一般有化學指示劑法、留點溫度計法、自制測溫管法和生物指示劑法。如，化學指示劑法。化學指示劑在一定溫度與作用時間下，會受熱變色或變形，根據這一特點來判斷是否達到需要的滅菌參數。一般實驗室常用的是3M壓力滅菌指示膠帶，這種指示膠帶是利用滅菌前后膠帶顏色變化來判斷滅菌效果。

 

　　檢測環境的維持

 

　　一、大環境

 

　　檢測室：

 

　　1.檢測時，窗戶和空調要關閉，或用酒精對房間進行噴霧消毒，避免房間內空氣流通影響超凈臺內部環境（最好在有通排風系統的恒溫恒濕無菌間進行操作）。

 

　　2.如果在原來的原料微生物檢測室進行檢測，要定期開啟紫外燈，對房間進行殺菌。

 

　　無菌室：

 

　　1.潔凈室（無菌室）是微生物檢測的重要場所與最基本的設施。它是微生物檢測質量保證的重要物質基礎。因此它的設計要按國家標準《潔凈廠房設計規范》、國家藥品監督管理局頒發的《藥 品檢驗所實驗室質量管理規范（試行）》中第十八條規定執行。微生物實驗室潔凈室的施工、安裝、驗收應按國家行業標準《潔凈室的施工及驗收規范》執行。對于微生物檢測工作者和使用管理者來講，更大量的工作是進行正常管理到日常的使用。潔凈室（無菌室）的標準要符合GMP潔凈度標準要求。

 

　　2.潔凈室（無菌室）要符合規范要求：無菌室應采光 良好、避免潮濕、遠離廁所及污染區。面積一般不超過10m2，不小于5m2；高度不超過2.4m。由1—2個緩沖間、操作間組成（操作間和緩沖間的門不應直對），操作間和緩沖間之間應具備滅菌功能的樣品傳遞箱。在緩沖間內應有洗手盆、毛巾、無菌衣褲放置架及掛鉤、拖鞋等，不應放置培養箱和其他雜物；無菌室內應六面光滑平整，能耐受清洗消毒。墻壁與地面、天花板連接處應呈凹弧形，無縫隙，不留死角。操作間內不應安裝下水道。無菌操作室應具有空氣除菌過濾的單向流空氣裝置，操作區潔凈度100級或放置同等級別的超凈工作臺，室內溫度控制18—26℃，相對濕度45%—65%。緩沖間及操作室內均應設置能達到空氣消毒效果的紫外燈或其他適宜的消毒裝置，空氣潔凈級別不同的相鄰房間之間的靜壓差應大于5Pa，潔凈室（區）與室外大氣的靜壓差大于10Pa。無菌室內的照明燈應嵌裝在天花板 內，室內光照應分布均勻，光照度不低于300lx。緩沖間和操作間所設置的紫外線殺菌燈（2—2.5w/m3），應定期檢查輻射強度，要求在操作面上達40uw/m2。不符合要求的紫外殺菌燈應及時更換。

 

　　二、小環境（超凈工作臺）

 

　　1.定期清潔初效過濾器，要及時更換。

 

　　2.檢測前，將超凈臺內部進行清潔，用75%酒精進行擦拭消毒，并提前半小時將超凈臺紫外燈打開，對超凈臺內部環境進行殺菌。

 

　　3.關紫外燈，開風機，調整合適進風量，風量不可過低。

 

　　4.每次檢測后，要對超凈臺內部進行清理、清潔，并用75%酒精進行擦拭消毒。

 

　　5.紫外燈根據其使用壽命要及時更換。

 

　　6.檢測同時，要做上相應菌落檢測的環境空白。

 

　　7.檢測區域的選擇：

 

　　a、一般在距離超凈臺外沿的1/3-2/3區域進行無菌操作；

 

　　b、要在酒精燈火焰的外焰保護區域進行操作。

 

　　工器具的潔凈度

 

　　1.玻璃器皿：采用干熱滅菌方式進行滅菌。

 

　　2.檢測用剪刀、勺子等物品要做到檢測專用，不可與其它操作器具混用，使用時，先用75%酒精消毒，再采用灼燒方式進行滅菌。

 

　　3.接種針（環）采用灼燒方式進行滅菌，但要注意檢測時要先將接種針（環）進行冷卻。

 

 

　　樣品的采集及檢測

 

　　一、保證采樣器具的無菌性

 

　　1.玻璃器皿：采用干熱滅菌方式進行滅菌，保證恒溫、時間足夠（但不可時間過長，容易導致玻璃器皿易裂紋而報廢）。

 

　　2.取樣筐：使用前要用75%酒精進行噴灑消毒。

 

　　3.取樣勺：要保證其清潔消毒，清潔后用75%酒精進行擦拭消毒。

 

　　4.取樣袋：可先用酒精進行擦拭消毒，再在超凈臺用紫外燈照射消毒，（包裝車間要在傳遞窗用紫外燈照射消毒）。

 

　　5.電子稱表面用75%酒精消毒。

 

　　二、人員操作

 

　　1.保證手部的清洗、消毒：取樣前及檢測前都要先洗手再消毒。

 

　　2.取樣要具有代表性（隨機樣、目的樣、綜合樣）且要標示清楚。

 

　　3.取樣完畢，不可在車間逗留，要及時將樣品放入超凈臺，對其外表面進行紫外燈照射消毒。

 

　　4.在要求的檢測區域進行操作。

 

　　5.檢測前，要用75%酒精棉球對樣品袋口部進行擦拭消毒，再開口。

 

　　6.往鹽水瓶加樣品時，要注意勺子或袋子盡量不接觸瓶口。

 

　　7.樣品計量要準確，稀釋倍數也要準確（1mL吸管不允許將管口敲掉），進行100倍稀釋時，1mL吸管要伸入鹽水中，不可以將樣品從管壁流下去，同時要避免將管底部捅破。

 

　　8.鹽水溫度以40℃左右為宜，不能過熱，會將部分微生物燙死；也不能溫度太低，不能將樣品溶解完全。

 

　　9.進行稀釋時，要搖勻，保證溶液的均一性。

 

　　10.傾倒平皿時，要注意培養基瓶口不要接觸到平皿；傾倒的培養基要適量，不可以太少，在培養過程中易干掉，微生物亦死亡，以15mL左右為宜。

 

　　11.做大腸菌群樣時，要提前將乳糖膽鹽培養基培養管按需要量備好，放入超凈臺對外表面進行紫外線滅菌。

 

　　12.接二步時，要注意先將接種針（環）進行冷卻，避免出現接不上菌落的情況，導致無法判斷、確認。

 

　　13.檢測完畢，及時放入相應培養箱進行培養，并清理清潔超凈臺。

 

 

　　1.在培養過程中，要隨時監控培養箱溫度，保證其在適宜的溫度進行培養。