1、確定參數：實驗室質控部門一般會告知能力驗證樣品基本信息。我們實驗是參數是單核增生李斯特。
2、確定檢測方法：GB 4789.30定性檢驗。
3、確認實驗方案：把所涉及的試劑進行排查，查詢是否缺某種試劑；整個實驗流程按思路整理下來，便于實驗操作時記錄每天實驗完成情況及結果。
4、配置所需培養基：無菌水、FB1、FB2、PALCAM、單增顯色板、TSA-YE等。
二、實驗操作
1、閱讀說明書，水化凍干粉（如下圖）
注意事項：多多少少做了好幾次能力驗證，這里水化時建議提前準備無菌三角瓶或者無菌袋，分四次水化安培瓶，每次5mL。最后水化共計40mL混勻備用。
開取西林瓶時，注意盲樣狀態是否完好，若是灑落，記得拍照留下證據。
2、實驗步驟
2.1吸取25ml水化的樣品加入225mL的FB1培養基中，30℃培養24h。
注意事項：在這里，我們可以先分別分離菌落在PALCAM、單增顯色板上， 36℃培養24-48h.看是否有雜菌或者是否無菌生長，給后面實驗提供信息（如下圖左），同時需要帶上單核增生李斯特標準菌株ATCC19115（如下圖右），以及單增系列的輔助標準菌株（見后面）。
這里我們的實驗結果：一個平板無菌生長；一個平板菌落典型藍紫色，類似標準菌株。
2.2 從FB1培養基吸取0.1mL加入LB2培養基中，30℃培養24h。
2.3 從FB2培養基中挑取一環分離在PALCAM、單增顯色板上，培養36℃24-48h，對比之前未選擇性增菌的PALCAM、單增顯色板。
注意事項：一般定性檢測會加干擾菌，經過FB1 FB2的選擇性增菌，既增加了單增的目標菌，又抑制了雜菌，所以這一步很重要。經過選擇性增菌后實驗結果：一個平板淡黃色、圓形、光滑、濕潤；一個平板菌落典型藍紫色，類似標準菌株.
2.4 初篩
自選擇性瓊脂平板上分別挑取3個~5個典型或可疑菌落,分別接種木糖、鼠李糖 發酵管,于36 ℃±1 ℃培養24h±2h,同時在 TSA-YE平板上劃線,于36℃±1℃培養18h~24h,然后選擇木糖陰性、鼠李糖陽性的純培養物繼續進行鑒定。
挑取一單獨菌落分別接種木糖與鼠李糖，如下圖：
注意事項：以上圖片為單增標準菌株以及各種輔助標準菌株的木糖、鼠李糖實驗結果。然后選擇木 糖陰性、鼠李糖陽性的純培養物繼續進行鑒定。
2.5 鑒定
2.5.1 用上述的平板進行生化鑒定實驗，按照試劑條說明書進行和標準菌株對比如下：
2.5.2 染色鏡檢：革蘭氏陽性短桿菌，如下圖：
注意事項：右圖是左圖藍色區域的放大。
2.5.3 動力試驗挑取純培養的單個可疑菌落穿刺半固體SIM 動力培養基,于25 ℃~30 ℃培養 48h,李斯特氏菌有動力,在半固體或 SIM 培養基上方呈傘狀生長,如傘狀生長不明顯,可繼續培養 5d,再觀察結果。
2.5.4 生化鑒定:挑取純培養的單個可疑菌落,進行過氧化氫酶試驗,過氧化氫酶陽性反應的菌落繼續 進行糖發酵試驗和 MR-VP試驗。過氧化氫酶試驗：陽性，如下圖：
注意事項：A是空白，B、C是陽性反應。
2.5.5 溶血試驗：
單增李斯特氏菌在刺種點周圍產生狹小的透明溶血環；斯氏李斯特氏菌在刺種點周圍產生狹小的透明溶血環；英諾克李斯特氏菌無溶血環；伊氏李斯特氏菌產生大的透明溶血環。
如下圖：
注意事項：單核增生李斯特氏菌在靠近金黃色葡萄球菌的接種端溶血增強；斯氏李斯特氏菌的溶血也增強；伊氏李斯特氏菌在靠近馬紅球菌的接種端溶血增強。
2.6 結果與報告 綜合以上生化試驗和溶血試驗的結果,報告40mL樣品中檢出或未檢出單核細胞增生李斯特氏菌。
